ELISA：本法主要用于检测型特。该现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测。下面以AP2型的ELISA检测法为例介绍其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加工作量1:4稀释被检猪100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加100μl工作量兔抗AP2型 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干⑤ 加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑦ 用ELISA检测仪测定OD值。本试验同时设阴、阳性对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。
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ELISA试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检剂盒、ELISA Kit、酶联试剂盒、酶联吸附测定试剂盒、酶联分析试剂盒、酶剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检剂盒、酶联吸附测定试剂盒等。
ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,全 科研工作者的认可及推崇,在欧美及很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。
Elisa生物试验是一种性高,特强,重复性好的实验诊断。由于其试剂、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在学检验的各领域中。ELISA检剂盒适用于体外定性检测人或中的抗人类(HEV) IgM ELISA检测。
ELISA检剂盒应用定性夹心检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,这些就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经 次孵育后,酶结合物就会与 次孵育结合上的HEV IgM相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa试剂盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
用途:
ELISA的基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或仍保持其学活性,酶标记的抗原或既保留其学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的或抗原)与固相载体表面的抗原或起反应。用洗涤的使固相载体上形成的抗原复合物与中的其他分开。再加入酶标记的抗原或,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了反应的结果,使测定达到很高的度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定。
然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的才能充分发挥其学的优点。
产品特点:
一、、灵敏、特异的;
二、的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底度高的固相载体;
四、适用、、组织匀浆液、细胞上清液、等等多种标本类型;
五、节省实验经费。
elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为29.8mg/L,则认为回收率为99%。
点ELISA：与常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特不够高等。该的主要操作程序为：⑴载体膜的预处理及抗原包被 取纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使纤维素膜干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封闭 将纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被检 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶标，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次。⑸显色 加入新鲜配制的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗涤终止反应。⑹ 结果判定 以阳性、阴险作为对照，膜片出现深棕红色点者为阳性反应，否则为阴性反应。
凡在本公司购买ELISA试剂盒，可提供免费待测服务，视样本数量而定出结果时间，一般一周内出检测结果！
