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兔p53上调凋亡调节因子(PUMA)ELISA试剂盒多种属供应

更新时间:2024-05-30 12:44:21 [举报]


兔p53上调凋亡调节因子(PUMA)ELISA试剂盒多种属供应



ELISA实验通用规则



1、要移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。



2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后,要更换枪头。即使是吸取品时。



3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更。



4、实验时,要使底物避光保存。



5、用枪吸取时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。



6、吸取时,要用量程和需要量接近的枪去吸,误差。



7、将加到酶标孔中时,避免枪头和孔内,可使枪头上的液滴和孔壁,液滴会自然流下去。



8、全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。



9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。



10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去后,要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。



11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。



12、底物是光的,要在临用前现配。



13、检测前,要打开酶标仪,使之10分钟以上。



14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免。



15、待检样品要澄清,否则会影响结果。



16、温浴时间应遵守试剂盒规定。



17、应尽量做双孔实验,这样才能数据的准确性。



18、对结果有疑问的样品要用其它进行确证。







做好对照



正式试验时,应分别以阳性对照阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特反应,可采用羊、兔或BSA等封闭。



ELISA法是诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、病及非传染病等方面的诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于流行病学调查。本法不仅可以用来测定,而且也可用于测定中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,



ELISA试剂盒基于抗原之间的特异结合反应,以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原,而则为纯化抗原动物后的多克隆和使用杂交瘤技术的单克隆,而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成制备。ELISA试剂盒的作用ELISA试剂盒是一种用于体外定性检测人或中的特定的试剂盒,例如抗人类戊型(HEV)IgMELISA检剂盒。ELISA试剂盒具有灵敏度高、特好、操作简便、安全、快速等优点,可以用于检测类因子、、等,在临床诊断、科研和生物制品检测等领域具有广泛的应用。






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实验条件的选择



ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:



(1) 固相载体的选择:许多可作为固相载体,如聚氯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。



(2) 包被(或抗原)的选择:将(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。



(3) 酶标记工作浓度的选择:用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度)在正式实验里准确地滴定其工作浓度。



(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMBABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。









 

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